流式細(xì)胞儀濾光片應(yīng)用

　　流式細(xì)胞術(shù)(FCM)是一種細(xì)胞分析儀，用于檢測染色細(xì)胞標(biāo)記物的熒光強(qiáng)度。它是一種快速測量和收集細(xì)胞物理或化學(xué)性質(zhì)(如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA、RNA、蛋白質(zhì)、抗原等)的高技術(shù)?；趯渭?xì)胞的分析和分類。

　　工作原理簡介：采用激光作為激發(fā)源，保證更好的單色性和激發(fā)效率;采用熒光染料和單克隆抗體技術(shù)相結(jié)合，保證檢測的靈敏度和特異性;計(jì)算機(jī)系統(tǒng)用于在流動(dòng)的單細(xì)胞懸浮液中實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞的多參數(shù)信號(hào)。數(shù)據(jù)處理和分析保證了檢測速度和統(tǒng)計(jì)分析的準(zhǔn)確性。

　　流式細(xì)胞術(shù)主要由五個(gè)部分組成：

　　1、流動(dòng)室和液體流動(dòng)驅(qū)動(dòng)系統(tǒng);

　　2、激光光源和光束形成系統(tǒng);

　　3、光學(xué)系統(tǒng);

　　4、信號(hào)檢測和存儲(chǔ)、顯示和分析系統(tǒng);

　　5、細(xì)胞分選系統(tǒng)。

　　其中，激光源和光束形成系統(tǒng)：流式細(xì)胞儀可配備一個(gè)或多個(gè)激光管。常用的激光管是氬離子氣體激光管。其發(fā)射波長為488nm。此外，還可以配備氦-氖離子氣體激光管(波長633nm)和/或紫外線激光管。

　　流式細(xì)胞儀檢測的主要信號(hào)熒光由激發(fā)光激發(fā)。熒光信號(hào)的強(qiáng)度與激發(fā)光的強(qiáng)度和輻照時(shí)間有關(guān)。激光是一種相干光源，它能提供單波長、高強(qiáng)度、高穩(wěn)定性的光源，是滿足這一要求的理想激發(fā)光源。

　　激光源和流腔之間有兩個(gè)圓柱形透鏡。激光源發(fā)射的圓截面激光束聚焦成截面較小(22微米x 66微米)的橢圓激光束。在這個(gè)橢圓激光光斑中，激光能量是正態(tài)分布的，因此通過激光探測區(qū)的細(xì)胞的輻照強(qiáng)度是一對。

　　該光學(xué)系統(tǒng)由幾組透鏡、孔和濾光片組成，可分為兩組：流室前部和流室后部，透鏡和小孔(通常是兩個(gè)透鏡和一個(gè)小孔)的主要功能是將激光源發(fā)射的具有圓形截面的激光束聚焦成具有較小截面的橢圓激光束，使激光能量能夠正常分布，使細(xì)胞通過通過激光可以獲得探測區(qū)域。流室后面的光學(xué)系統(tǒng)主要由幾組濾光片組成。濾波器的主要功能是將不同波長的熒光信號(hào)發(fā)送給不同的光電倍增管。

　　有三種主要類型的濾波器：長波濾波器(LPF)-只允許光通過特定波長，短波通濾波器(SPF)-只允許低于特定波長的光，帶通濾波器(BPF)-只允許光通過特定波長，不同的濾波器組合可以將不同波長的熒光信號(hào)發(fā)送到不同的光電倍增管(PMT)，例如，配置在接收綠色熒光(FITC)的PMT前面的濾波器是在LPF 550和BPF 525的PMT前面配置的接收橙色紅色熒光(PE)的濾波器，而在LPF 600和BPF 575前面配置的接收紅色熒光(CY5)PMT的濾波器是LPF 650和BPF 675。

　　流式細(xì)胞術(shù)發(fā)明之初，主要用于細(xì)胞分類。隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)、免疫學(xué)的發(fā)展和單克隆抗體技術(shù)的發(fā)明，它在細(xì)胞動(dòng)力學(xué)分析、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞分類和癌癥診斷等生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)領(lǐng)域得到了越來越廣泛的應(yīng)用。有許多領(lǐng)域，如停藥，藥物療效分析等。近年來，多功能流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展，多參數(shù)分析技術(shù)的建立，以及各種功能強(qiáng)大的分析軟件的開發(fā)，為提高流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和擴(kuò)大分析能力提供了保證。